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植物淀粉含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
淀粉是植物中糖的主要儲(chǔ)存形式,其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。
測(cè)定原理:
利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開(kāi),進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖,采用蒽酮比色法測(cè)定葡萄糖含量,即可計(jì)算淀粉含量。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸(不允許快遞)、
研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;
淀粉提取:
1、 稱(chēng)取0.1~0.2g 樣本(建議稱(chēng)取約0.1g樣本)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀。
2、 沉淀中加入0.5mL蒸餾水,放入95℃水浴中糊化15min(蓋緊,以防止水分散失)。
3、 冷卻后,加入0.35mL 試劑二,25℃提取15min,振蕩3-5次。
4、 加入0.85mL 蒸餾水,混勻,3000g,25℃離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定操作表 (在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑) :
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。
3、 工作液的配制:臨用前在試劑三中加入7.5mL蒸餾水后,緩慢加入42.5mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用;用不完的試劑 4℃保存一周;
4、 樣本測(cè)定:取0.2mL樣本和1mL工作液至EP管中,95度水浴10 min(蓋緊,防止水分散
失),自然冷卻至室溫,在620 nm 波長(zhǎng)下記錄測(cè)定吸光度值A(chǔ)。
淀粉含量計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y=5.872x-0.0295;
x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
1、按照蛋白濃度計(jì)算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按樣本鮮重計(jì)算
淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1]÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1.7 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)
濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意 :由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性,請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。
若吸光值大于1,請(qǐng)將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
提取液的配置:0.35mL 試劑二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。
低檢測(cè)限為10μg/g 鮮重或100ng/mgprot 。