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SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)說明書
更新時間:2020-09-27 點擊量:1951

  

 

SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)說明書

Stacking Gel Solution (4×)

目錄號:K0025

保存條件:2-8℃保存。

組分說明

 

                      Cat No.          K0025A

                      Volume             200 ml

本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

產品簡介

本產品為配制 SDS-PAGE濃縮膠緩沖液,可用于配制各種濃度的變性及非變性

PAGE凝膠,方便、快捷。產品中已加入10%SDS,使用時不用另外加入。

操作步驟

根據目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,Z*佳膠濃度請參考附表1。

 I 灌制分離膠(各試劑使用量請參考附表2)

1.參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

 

   注:加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸,是否加入上層篩板可根據實際情況選擇。

2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。

3.加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

4.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于 mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端

   1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,

   使凝膠表面保持平整。

 

5.靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,表面凝膠已聚合。

 II灌制濃縮膠(各試劑使用量請參考附表3)

1.去除覆蓋在分離膠上的水層。

2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個小燒杯或試管中混

   合。

3.加入10%過硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

4.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

5.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

6.靜置10~20分鐘,等待濃縮膠聚合。

7.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

8.進行常規電泳操作。

 

 附表

 

                     附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與Z*佳分離范圍

 

                      SDS-PAGE分離膠濃度                       *J分離范圍

                               6%膠                         50-150 kD

                               8%膠                          30-90 kD

                              10%膠                          20-80 kD

                              12%膠                          12-60 kD

                              15%膠                          10-40 kD

 

 

                               

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