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產(chǎn)品目錄

青霉素（檢測牛奶、蜂蜜）操作步驟

更新時間：2021-04-01　點擊量：2900

青霉素

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物青霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗青霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物青霉素的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物青霉素的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.1ppb
孵育溫度： 25℃
孵育時間： 30min～30min～15min
樣本檢測下限

組織、蜂蜜、牛奶 ································ 2ppb

蜂蜜、牛奶樣本因存在一定的干擾，定量檢測下限為4ppb

交叉反應率

青霉素· ········································ 100%

氨芐青霉素········································ 0.8%

鄰氯青霉素 ······································· 0.2%

雙氯青霉素 ······································· 0.1%

阿莫西林 ········································· 0.1%

頭孢塞呋 ········································· 0.1%

樣本回收率

組織 ········································· 75±19%

蜂蜜、牛奶 ·································· 70±17%

三、試劑盒組成

1	微量測試孔	每條8孔，一板12條
2	標準液×6瓶（1ml/瓶）	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1ppb
3	酶標記物	12ml	紅色帽
4	抗體工作液	7ml	藍色帽
5	底物A液	7ml	白色帽
6	底物B液	7ml	黑色帽
7	終止液	7ml	黃色帽
8	20X濃縮洗滌液	40ml	白色帽
9	5X濃縮復溶液	50ml	透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl

試劑：氫氧化鈉、乙腈、正己烷、亞硝基鐵氰*+化鈉、硫酸鋅

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。

樣本前處理需配制：

配液1 C液（牛奶、奶粉樣本）：

10.7g 亞硝基鐵氰*+化鈉加去離子水100ml溶解。

配液2 D液（牛奶、奶粉樣本）：

28.8g硫酸鋅加去離子水100ml溶解。

配液3 0.1M NaOH溶液

0.4gNaOH加去離子水100ml溶解。

配液4 乙腈-0.1M NaOH溶液

84ml乙腈16ml 0.1M NaOH混合均勻

配液5 樣本復溶液：

將5X濃縮復溶液用去離子水按1：4稀釋。

配液6 1M NaOH溶液

4g NaOH加去離子水100ml溶解

樣本處理：

（a）組織（雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法

稱取2±0.05g均質(zhì)后樣本于50ml離心管中，加入2ml 1M NaOH溶液，渦旋2min，再加入8ml乙腈振蕩5min，室溫4000r/min以上離心10min；
取出1ml上清液，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；
加入1 ml樣本復溶液溶解干燥殘留物，混合30s；將溶解后的樣本液按1：3（50µl樣本液加150µl樣本復溶液）稀釋，混合30s；
取50 µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù): 20倍

（b）蜂蜜處理方法

準確稱取1±0.05g蜂蜜樣本于離心管中，加入3ml 樣本復溶液，振蕩混勻后靜置20min；室溫4000r/min 以上離心10min；
取上層液體用樣本復溶液按1：4（20µl樣本液+80µl稀釋后的復溶液）稀釋，混合30s；
取50µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù): 20倍

（c） 牛奶樣本處理方法一

取2ml鮮牛奶于5ml離心管，加入50µlC液混勻；
加入50 µl D液振蕩1min，10℃ 4000r/min以上離心10min；
取上層清亮液體用樣本復溶液按1： 19（20µl樣本液+380µl樣本復溶液）稀釋，混合30s；
取50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：20

注：如果離心后仍然渾濁，再重復沉淀過程。

（d）牛奶樣本處理方法二

取2ml去除脂肪奶樣至離心管中；
加入8ml乙腈-0.1M NaOH充分振蕩2min，15℃ 4000r/min以上離心10min，取1ml上清液，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；
用1ml正己烷溶解干燥的殘留物后，再加入1ml樣本復溶液混合30s，離心去除正己烷相；
取下層相用樣本復溶液按1：3 （50µl樣本液加150µl稀釋后的復溶液）稀釋，混合30s；
取50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù): 20倍

六、 酶標免疫分析程序:

測定前應須知：

使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加加入抗體工作液50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應30min。
將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
每孔加入酶標記物100µl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應30min。將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗，4～5遍（同上），用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值。

七、結果判定

結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含青霉素量成負相關。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.3ppb為1.415；0.9ppb為0.74；2.7ppb為0.313；8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb～8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb～0.9ppb，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中青霉素實際濃度。