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豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

通用名稱：豬偽狂犬病病毒gB抗體阻斷法ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Blocking ELISA Kit For Pseudorabies Virus gB Antibody Test Kit

【規格】

96T×2/盒

【用途】

檢測血清、血漿中豬偽狂犬病毒gB抗體，適用于對豬場疫苗免疫狀況的評價以及感染豬的血清學診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒是用來檢測豬血清中豬偽狂犬病毒gB抗體的試劑盒。該試劑盒是用豬偽狂犬病毒抗原包被的微量反應板，利用阻斷ELISA原理來檢測豬血清中豬偽狂犬病毒抗體。用酶標儀在雙波長(450nm，630nm)測定該反應體系的吸光度。當被測樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體(陽性結果)時，顯色就會變淺，當被測樣品中不含有抗豬偽狂犬病毒抗體(陰性結果)時，顏色就會變深。樣本的阻斷率可以通過與陰性對照吸光度的比值來確定。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀：雙波長450/630nm濾光片

2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

本試劑檢測的樣本為豬血清或血漿，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在－20℃以下保存。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡：試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得最佳結果。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本和陰性、陽性對照血清作2倍稀釋（即：60μl血清加60μl樣本稀釋液），混合均勻。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使結晶*溶解。

【檢驗方法】

1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入稀釋好的陰性、陽性對照血清100μl于相應孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10秒，直接甩出，洗滌3次，最后一次洗滌后在吸水紙上拍干板內液體。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5. 溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，室溫37℃避光反應10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數。

9．讀數：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔OD值，試驗成立的條件是陰性對照OD值大于1.0，陽性對照的阻斷率均大于60％，若試驗不成立，有可能是操作失誤造成，應重讀說明書，再操作一次。

S=樣品孔OD值，N=陰性對照孔平均OD值

阻斷率=(1–S/N)×100%

若被檢樣品的阻斷率小于或等于50%，該樣品判為PRV抗體陰性。

若被檢樣品的阻斷率大于或等于60%，該樣品判為PRV抗體陽性。

若被檢樣品的阻斷率在50%~60%之間，該樣品判為可疑。

【注意事項】

1．本試劑盒僅供研究使用。

2．不要使用過期的試劑盒組份，不要把不同批次的組份混合使用。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。

4 使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20～25℃），并搖動使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水），混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日。

5．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

6．微孔板從冷藏環境中取出時應在室溫中平衡。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃－8℃避光保存。

7．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經常校對其準確性。

8．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個月。

【生產日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

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