*0感受態細胞說明書
*0 Competent Cell
*0感受態細胞
目錄號:B0807
保存條件:-80℃保存。
組分說明
Cat. No. B0807B
Size 10×100 μl
*0 Competent Cell 10×100 μl
Control DNA pUC19,0.1 ng/μl 10 μl
產品簡介
本產品是大腸桿菌*0菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于 DNA的熱擊轉化。*0是一種常用于質??寺〉木?,其φ80lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補,可用于藍白斑篩選。使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達10 8 ,適用于的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。
本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途
注意事項
1.感受態細胞一定要用干冰運輸。感受態細胞應在 -80℃下保存,不可反復凍融和放置時間過長,以免降低感受態細胞的轉化效率。
2.轉化所有步驟均在無菌條件下操作。
3.包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗使用。
操作步驟
1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50 μl感受態細胞為例。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。
注意:1)涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多,可取少量轉化產物涂布平板;若轉化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少,可通過離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2)新制備的固體培養基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。
實驗代做服務:
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