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使用克倫特羅檢測試劑盒試驗前的準備工作
更新時間:2019-12-26 點擊量:4062
       克倫特羅檢測試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物克倫特羅將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗克倫特羅抗體,加入酶標記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物克倫特羅的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物克倫特羅的含量。
  克倫特羅檢測試劑盒的樣本前處理步驟:
  一、樣本處理前須知
  (a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
  (b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。
  u 樣本前處理需配制:
  配液 1  0.1M HCl 溶液取 0.86ml 濃 HCl 加水定溶至 100ml。
  配液 2  0.1M NaOH 溶液稱取 0.4g NaOH 加水定溶至 100ml。
  配液 3  乙腈-0.1M HCl 溶液V 乙腈:VHCl =84:16。
  二、樣本處理:
  (a)尿樣本的處理方法
  取 20?l 清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定要過濾或 4000r/min 離心 10min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。 3、 在 ELISA 分析中的再現性,很大程度上取決于樣本稀釋倍數:  1 倍 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定
  (b)組織樣本的處理方法一 程序中的要點。
  1、稱 2±0.05g 均質后的組織至 50ml 離心管中,加 4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜入 6ml 去離子水,充分振蕩 2min,室溫 蓋住微孔板。
  4000r/min 以上離心 10min(注:若組織樣本中油 u  操作步驟:
  脂含量較高,可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 1、從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~后再離心); 25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使
  2、取 20?l 上層液進行分析。 用前均須搖勻。
  樣本稀釋倍數:  4 倍 2、取出框架及需要數量的微孔,將不用的微孔放
  (c)組織樣本的處理方法二 入自封袋,保存于 2~8℃。
  1、稱取 2 ± 0.05g 均質后的組織于 50ml 離心管 3、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每中,加入 6ml 乙腈-0.1MHCl,振蕩 2min,室溫 個樣本和標準品做 2 孔平行,并記錄標準孔和
  4000r/min 以上離心 10min; 樣本孔所在的位置。
  2、取上清 3ml,加入 2ml 0.1M NaOH,加入 6ml 4、加標準品/樣本 20?l/孔到各自的微孔中,然后加乙酸乙酯,振蕩 1min,室溫 4000r/min 以上離 酶標記物 50?l/孔,再加入 80?l/孔的抗體工作心 10min。取全部上清于 50~60℃氮氣流或空 液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境氣流吹干; 反應 30min。
  3、加入 1ml 去離子水溶解干燥后的殘留物,混合 5、將孔內液體甩干,用去離子水 250?l/孔洗板 4~30s; 5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙拍干(拍
  4、取 20 ?l 用于分析。 干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  樣本稀釋倍數: 1 倍 6、顯色:加入底物 A 液 50?l/孔,再加入底物 B
  (d)飼料處理方法 液 50?l/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯
  1、稱1.0±0.05g 研碎的飼料樣品于50ml 離心管中, 色 15min。
  加入 10ml 甲醇,再加入 5g 無水硫酸鈉,充分 7、測定:加入終止液 50?l/孔,輕輕振蕩混勻,設振蕩 2min;15℃ 4000r/min 以上離心 10min; 定酶標儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n
  2、吸出離心后的上清液 1ml,于 50~60℃氮氣流 m 檢測,5min 內讀數),測定每孔 OD 值。或空氣流吹干,用 1 ml 去離子水溶解干燥后的 七、結果判定殘留物,再加入 1ml 正己烷混合 30s ;15℃ 結果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方4000r/min 以上離心 5min;去除上層有機相;
  法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與
  3、取下層 20 ?l 用于分析。
  其所含克倫特羅量成負相關。
  樣本稀釋倍數:10 1、粗略判定。

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